O PCR em tempo real (real-time polymerase chain reaction) é um sistema baseado na detecção e quantificação de um sinal fluorescente. Há a detecção de produtos de amplificação: não-específico (Sybr Grenn®) e sequência-específica (sonda – fluoróforo + Quencher).
PCR tradicional x PCR em tempo real: No PCR tradicional há a detecção do produto no gel de agarose. Já na análise em tempo real, há a constante detecção e monitoramento dos produtos de amplificação durante toda corrida (emissão de fluorescência).
Apresenta como vantagens não ser influenciado por amplificação não-específica (sondas); a amplificação pode ser monitorada em tempo real; os ciclos são mais rápidos; maior extensão dinâmica; confirmação da amplificação específica (análise da curva de melting); requer menos DNA; é mais específico, sensível e reproduzível.
Suas desvantagens são: sua utilização requer alta habilidade técnica e suporte e seu equipamento é de alto custo.
Possui como fases: exponencial, linear e platô:
Os sinais são detectados por um sistema óptico e analisados por software específico. Os sinais de fluorescência são expressos graficamente, permitindo monitorar em tempo real a cinética e a eficiência da reação de amplificação.
Referências:
CARVALHO, R.F. PCR em Tempo Real, Unesp.
http://www.publicacoesweinmann.com.br/2009/04/pcr-quantitativo-em-tempo-real.html
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